Архив рубрики «БАКТЕРИОФАГ»
В 1955 г. В. Д. Тимаковым и Д. М. Гольдфарбом был предложен новый метод определения патогенных микроорганизмов непосредственно в исследуемом материале без выделения чистой культуры. Этот метод, названный реакцией нарастания титра фага, основан на способности фага к репродукции в гомологичных бактериях.
Учитывая данные о механизме взаимодействия фага с бактерией, авторы разработали принципиальную схему реакции, которая заключается в следующем.
1. Превращение исследуемого материала в оптимальную среду для взаимодействия фага и клетки.
2. Добавление к субстрату определенного количества индикаторного фага, выраженного числом частиц.
3. Инкубация смеси (материал + фаг) при 37° для реализации контакта фага с бактерией и последующего его размножения в ней.
4. Отделение размножившегося фага от посторонней микрофлоры.
5. Количественный учет фага по методу Грациа.
На основе изучения отдельных этапов взаимодействия фага и бактерий В. Д. Тимаков и Д. М. Гольдфарб сформулировали понятие индикаторный фаг , который главным образом определяет чувствительность и специфичность предложенного метода. Индикаторным может служить вирулентный фаг, характеризующийся точно лимитированным спектром действия. В зависимости от целей и задач исследования этот спектр может быть различным. Так. если в объектах внешней среды необходимо установить присутствие возбудителя без конкретизации его антигенной, биохимической, типовой пли даже видовой принадлежности, то в подобных случаях можно использовать индикаторный фаг с относительно широким спектром. Наоборот, для решения ряда эпидемиологических задач, когда возникает потребность видовой илн даже типовой идентификации возбудителя, необходим индикаторный фаг с узким спектром действия.
Кроме того, индикаторный фаг должен обладать высокой адсорбционной способностью, коротким латентным периодом и высоким урожаем. Все эти свойства могут обеспечить значительное увеличение титра фага в испытуемой смеси и тем самым повысить эффективность реакции.
Практическое испытание реакции нарастания титра фага показало ее высокую эффективность реакция оказалась в несколько раз чувствительнее обычного бактериологического метода, она требует почти втрое меньше времени для определения возбудителя и благодаря своей простоте доступна любой лаборатории. Реакция была разработана применительно к определению возбудителей дизентерии, брюшного тифа и паратифов, бруцеллеза, холеры и чумы. С помощью этой реакции оказалось возможным определять возбудителей инфекционных заболеваний в материалах от людей, на предметах внешней среды, в воде и пищевых продуктах.
В настоящее время в практике эпидемиологического обследования широко применяется фаготипирование бактерий метод дифференцирования их внутри вида или серотипа. Этот метод позволяет распознать подлинный источник инфекции и дает возможность проследить иногда очень сложный путь передачи возбудителя от источника до восприимчивого организма. Преимущества метода фаготипирования заключаются в том, что с помощью фагов можно более тонко подразделить возбудителей инфекционных заболеваний, чем это делали с помощью биохимических, биологических или даже серологических тестов.
Существует два способа фаготипирования бактерий. При первом из них микробов подразделяют на фаготипы по свойствам выделяемых из них умеренных фагов, при втором по чувствительности микробов к специфическим (типовым) фагам в определенном разведении.
Благодаря широкому распространению умеренных фагов среди патогенных бактерий эти фаги, находясь в состоянии профага и передаваясь от родительской клетки дочерним, служат своеобразной меткой бактерии. Следовательно, для определения фаготипа бактерии необходимо произвести непосредственную идентификацию выделяемого ею фага. Этот метод, названный прямым методом фаготипирования, позволяет распознавать эпидемиологически родственные штаммы, выяснять происхождение и пути распространения инфекции. С помощью прямого метода определяют фаготипы салмонелл, кишечных палочек, однако трудоемкость и длительность данного метода несколько ограничивают его использование.